细胞凋亡检测最火方法——Annexin V/PI双染法

每一种方法都有其优缺点,本文我们来介绍目前最受欢迎的亡检测手段之一——Annexin V/PI双染法。

凋亡(Apoptosis),或者说程序性细胞死亡,是细胞内建的防御机制之一,在生物的正常发育及疾病抵御中起到重要的作用。

7c4e501afc324b25b51d601f0e625435.gif

凋亡是个复杂的过程,至少有两种主要途径 – 内在和外在 – 导致了程序性细胞死亡。目前至少有十数种检测细胞凋亡的方法,从大框架上讲,可以划分为基于细胞形态、生物学功能和生化标记三大类。

然而,每一种方法都有其优缺点,本文我们来介绍目前最受欢迎的亡检测手段之一——Annexin V/PI双染法

基本原理

细胞凋亡早期的特征之一是磷脂酰丝氨酸(phosphatidyl—serine,PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。而人膜联蛋白V(AnnexinV)对PS具有特异的亲和作用,将Annexin V进行荧光素——FITC标记,作为一敏感的探针可检测暴露在细胞膜表面的PS,利用流式细胞仪或者荧光显微镜观察细胞凋亡现象。

这种方法不需要固定细胞,避免了因固定造成的假阳性等问题,结果亦更可靠,这是目前公认的灵敏、高效和成熟的凋亡细胞检测方法之一。

流式Annexin V系列凋亡试剂盒

e20b36ef3f554379a96567a0b0270c6d.png

正常细胞膜磷脂的分布是不对称的,膜内表面含负电的磷脂(如PS)。在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面。Annexin V是一种Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin V与PI、7-AAD等核染色液搭配使用,用流式细胞仪检测就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。

Elabscience Annexin V系列凋亡试剂盒的产品优势

1、多种标记物(FITC、PE、APC、AF647/PI、7-AAD)选择,满足不同待测样本和检测仪器的需求;

2、多种试剂盒相关组分在售,灵活满足不同的实验需求;

3、检测早期凋亡最理想的方法,不需固定环节从而避免相关的假阳性;

4、只需15-20分钟,简单快捷;

5、严格可靠的质量控制,保证优异的实验结果;

6、专业的售前售后技术支持,可以更好完成凋亡实验。

Annexin V系列凋亡检测产品目录

Ø Annexin V荧光双染凋亡试剂盒

c6795042c6724c2da16f39e038af29ff.png

Ø Annexin V凋亡检测单品

28f86eb188b041868b9a824b5b89127b.png

Ø Annexin V蛋白

b7d05d086cd445248bd4c0a4232ba228.png

实验数据:Annexin V-FITC/PI检测试剂盒分群效果优异

Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左) 或未加药 (右) 处理4 h,Annexin V-FITC/PI检测试剂盒染色后FCM检测。Annexin V-FITC单阳为早期凋亡细胞,Annexin V-FITC和PI双阳细胞为坏死或晚期凋亡细胞,PI单阳细胞为裸核细胞。

5870f1c4f67c4d839caec53e7a10dd77.png

流式检测细胞凋亡的数据分析方法:

1) 选中所有颗粒,将FSC和SSC设置成对数坐标轴模式备用;

2) 将横轴和纵轴分别设成Annexin通道和PI通道(7-AAD与此类似),选取双阴细胞群;

3) 在双阴细胞门中,将横轴和纵轴分别设成FCS和SSC,将数据呈现方式改为轮廓图,找到细胞碎片,划出碎片门,应用于所有细胞;

4) 在所有细胞中,反选碎片门,得到所有细胞;

5) 将横轴和纵轴分别设成Annexin通道和PI通道,参照未经药物处理的对照组,划出十字门,确定不同群细胞的比例。

23c8655734494cc5a3654ea85e5ea50a.jpeg

生物女学霸,一个自称学霸其实很渣的生物汪,
努力将有趣的、有用的、有血有肉的科研那些事儿呈现给大家,
关注一个好不啦~
  • 发表于 2019-05-18 11:05
  • 阅读 ( 8495 )
  • 分类:实验相关

0 条评论

请先 登录 后评论
生物女学霸
生物女学霸

生物专业

120 篇文章

作家榜 »

  1. omicsgene 654 文章
  2. 安生水 325 文章
  3. Daitoue 167 文章
  4. 生物女学霸 120 文章
  5. 红橙子 78 文章
  6. CORNERSTONE 72 文章
  7. rzx 67 文章
  8. xun 66 文章