抗体生产的三个阶段-重组抗体的几种形式详解

重组抗体,也称为基因工程抗体,是指通过DNA重组技术将抗体相应的基因序列根据需要进行改造和重组,并构建在质粒上,再通过蛋白外源表达技术将构建好的质粒转染/转化入适合的宿主细胞表达获得的抗体。重组抗体很好的解决了动物源抗体引起的人体排斥反应,使得抗体实现人源化,使抗体的效能更为完善。

重组抗体,也称为基因工程抗体,是指通过DNA重组技术将抗体相应的基因序列根据需要进行改造和重组,并构建在质粒上,再通过蛋白外源表达技术将构建好的质粒转染/转化入适合的宿主细胞表达获得的抗体。重组抗体很好的解决了动物源抗体引起的人体排斥反应,使得抗体实现人源化,使抗体的效能更为完善

 

抗体生产的三个阶段

 

抗体广泛应用于疾病的诊断和治疗,是研究和应用领域最有价值的研究对象之一。抗体制备技术经历了三个阶段

第一阶段,通过抗原免疫高等动物,从动物的血清中纯化获得抗体,该抗体为多克隆抗体;

第二阶段,杂交瘤技术问世,通过将无限增殖的骨髓瘤细胞与产生抗体的B淋巴细胞融合生产出针对单一抗原决定簇的单克隆抗体;

第三阶段,通过基因工程技术改造动物生产的单克隆抗体的基因序列,使单抗性能更加符合应用需要,并能通过大规模细胞培养获得,该阶段抗体为重组抗体。

 

重组抗体形式:

 

除了全长抗体,还制备不同形式的重组抗体,包括嵌合抗体、Fab片段、scFv片段和双特异性抗体。此外,还可以在多种表达系统中制备,包括细菌、昆虫细胞、酵母菌和哺乳动物细胞。

 

嵌合抗体:

嵌合抗体由基因工程技术制备而成,即通过将选定的小鼠杂交瘤免疫球蛋白(Ig)可变区与人Ig恒定区相连接,构建成嵌合抗体。

 

首先,处死免疫成功的小鼠后,摘取小鼠脾脏,分离 B 细胞。将骨髓瘤细胞与B细胞融合,形成杂交瘤细胞,并筛选产生抗原特异性IgG的阳性克隆。随后,从该克隆中分离编码小鼠VHVLDNA序列,并且从人细胞中分离编码人免疫球蛋白恒定区的DNA序列。通过基因工程构建小鼠/人嵌合基因,并将其转染至哺乳动物细胞。最后,选择高表达嵌合IgG的克隆,并从培养上清液中纯化IgG

 

Fab片段/scFv片段:

 

义翘神州在重组抗体表达方面具有丰富的经验,除了表达全长抗体外,还可以表达各种形式的抗体片段,如单链抗体 (scFv)、抗原结合片段(Fab)、纳米抗体 (VHH) 和抗体融合蛋白 (antibody-fusion proteins)等。基于优化的哺乳动物蛋白平台,义翘神州可在HEK293CHO细胞中的表达和生产Fab抗体片段。 利用此技术生产的Fab片段较酶切全长抗体获得的Fab片段具有更好的质量。

 

scFv可以在微生物系统如E. coli中表达, 也可以通过瞬转技术在哺乳动物细胞中表达。义翘神州具备在不同系统中表达不同抗体片段的能力,您可以根据实际需求进行选择。您只需将抗体片段的基因序列发送给我们,义翘神州负责完成从基因合成到最终纯化抗体片段的整个过程。

 

 

双特异性抗体的结构和形式:

 

由于抗体的模块化结构,目前已经产生了100多种不同的双特异性抗体形式。这些形式在许多方面均有不同,包括它们的分子量、抗原结合位点的数量、不同结合位点之间的空间关系和药代动力学半衰期等。

 

重组双特异性抗体可分为两种类型:具有Fc区的双特异性抗体和无Fc区的双特异性抗体。具有Fc区的双特异性抗体保留Fc-介导的效应功能,例如CDCADCC。此类抗体包括"knob into hole" IgGcrossMabortho-Fab IgGDVD IgGtwo in one IgGIgG-scFvscFv2-Fc等。

 

Fc区的双特异性抗体缺乏Fc-介导的效应功能。然而,相较于类IgG抗体,较小尺寸的抗体具有更好的肿瘤组织渗透性。在这种形式中,每个亲本单克隆抗体的可变区和多肽(linker)均被克隆,并形成单链双特异性抗体。这些双特异性抗体有多种形式,包括tandem scFvs、单链双抗体、TandAbsDARTdock-and-lockDNL)以及纳米抗体等。

 

更多重组抗体详情可以关注:https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/recombinant-antibody-overview

  • 发表于 2023-09-21 13:19
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xiaoqin2023
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