比对率低考虑污染。如果一定要继续往下分析建议做一下污染序列去除,或者只保留比对打分很高的部分进行后续分析。但是仍然存在风险:
1. 深度降低,数据可信度存疑:假设原始 10× 数据,比对上 30% 相当于有效深度只剩 ~3×,低于 WGS 可信 SNP calling 的常规底线
2. 如果各样本比对率不一致,低比对样本缺失率高,GWAS/PCA 会把“测序质量问题”误判成“群体结构”
样本原本是放在酒精中常温保存10年左右,酒精已经干了。在DNA提取中发现DNA量极低,使用MDA方法扩增建库,BGI测序后做群体遗传分析。在snp-calling中发现比对率异常,具体如下。
[root@1d066d310974 23:24:26 /work/reseq_demo/3.map/result]# cat 268.map.stat.txt
129649865 + 0 in total (QC-passed reads + QC-failed reads)
129589994 + 0 primary
59871 + 0 secondary
0 + 0 supplementary
15199133 + 0 duplicates
15199133 + 0 primary duplicates
40812477 + 0 mapped (31.48% : N/A)
40752606 + 0 primary mapped (31.45% : N/A)
129589994 + 0 paired in sequencing
64794997 + 0 read1
64794997 + 0 read2
40109494 + 0 properly paired (30.95% : N/A)
40284340 + 0 with itself and mate mapped
468266 + 0 singletons (0.36% : N/A)
144394 + 0 with mate mapped to a different chr
18468 + 0 with mate mapped to a different chr (mapQ>=5)
我的这个物种研究的人很少,在数据库中无近缘种的基因组报道,NT比对有60%的unknown序列(正常样本在90%左右)。是否还可以进行后续的snp分析。