重组蛋白制备的基本步骤有哪些?

重组蛋白的产生是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。

重组蛋白的产生是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。

 

为了产生重组蛋白,基因被分离并克隆到表达载体中。产生重组蛋白需要蛋白表达系统、蛋白纯化系统和蛋白识别系统。

 

获取重组蛋白的基本步骤:

1.目标基因的扩增。

2.插入克隆载体。

3.亚克隆到表达载体中。

4.转化到蛋白表达宿主(细菌(大肠杆菌)、酵母、哺乳动物细胞或杆状病毒-昆虫细胞系统)。

5.重组蛋白的鉴定试验。(western blot 或荧光)

6.大规模生产。(大型发酵罐)

7.分离和纯化。

 

重组蛋白技术:

 

重组蛋白是大规模生产的临床相关蛋白。靶蛋白的基因被克隆到载体上,并在模式生物中表达为蛋白。重组蛋白的生产需要重组基因技术、蛋白表达与纯化技术等一系统技术。义翘神州拥有多年生产6000个重组蛋白的经验,提供专业的重组蛋白服务。

 

• DNA分离和纯化:可以首先通过去除细胞壁和细胞膜成分来分离DNA。接下来,通过苯酚去除蛋白。最后,通过核糖核酸酶去除RNA。

• 蛋白表达:在哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母和细菌中选择合适的载体和最佳的表达系统,对于避免蛋白过量产生的毒性作用、确保蛋白正确折叠、提高蛋白稳定性、促进蛋白分泌具有重要意义。必须针对每个重组蛋白进行评估,以确定哪种系统可以发挥最佳效果。

• 蛋白纯化:蛋白纯化的目的是将靶蛋白从细胞裂解液的所有组分中分离出来,同时仍然保留蛋白的生物活性和化学完整性。蛋白的分离纯化是一项艰巨而繁重的任务,需要根据蛋白的特性选择合适的纯化方法,以提高所得蛋白产物的纯度。

 

更多详情可以参看:重组蛋白 https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review

  • 发表于 2023-08-11 15:05
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xiaoqin2023
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