荧光定量引物设计,是用CDS黏贴到NCBI,blast找到100%序列一致性的基因来设计引物还是,黏贴包含内含子的完整基因序列到NCBI设计引物?

我用不同的家族基因CDS黏贴到NCBI,发现100%序列的结果是相同的基因,感觉用包含内含子的完整基因序列来设计要好一点。但是发现用包含内含子的完整序列通过NCBIprimerblast来设计引物,发现不能选择跨内含子。不知道哪种方法好些。

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rzx

引物设计原则“引物应在核酸序列保守区内设计并有特异性;引物通常设计为跨内含子”,具体参考笔记:https://www.omicsclass.com/article/2227

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