BSA实验到底怎么取样比较好?

近期想做个BSA实验,子代混池规模是50+50,导师让我每个子代提取一份DNA,然后混合成一个池测序,可是公司不愿意这么干,我想问下,这个是必须的吗?

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1 个回答

omics007

这个问题其实是老生常谈了,我们先说说理想状态吧:

将每个子代样品都单独提取DNA,然后根据DNA的浓度,按等物质的量均匀混合成一份DNA,这样来自每个子代样品的DNA信息量就是等量的了,这样当然是最佳处理方式。

可实际情况是,如果你要求测序公司这么提取,他们肯定是不干的,毕竟一个BSA没多少钱,光提取100个DNA要花费很多人力,一般公司的做法(也是90%以上在公司做BSA测序的实际操作方法)是让你自己从每个样品上取等量的组织下来,然后混成一管,然后测序公司提取一份DNA作为混池样品。

这么做虽然是不如单独提取再混合DNA,但是其影响完全是可以接受的。因为虽然先混合再提取的做法,导致来自每个样品的信息并不等量,但是只要你取样足够理想,这些样品在目标位点的基因型应该是一致的,这样的话,虽然来自每个样品的信息不等量,但是他们在目标位置的信息是一致的,主要影响的是背景噪音的组成,这样并不影响我们后期数据分析时找到目标位点。

所以我个人最终的建议是:如果你能自己在实验室单独提取再混合那最好,如果交给公司还是混合好组织再提取吧,因为你强行让公司给你单独提取,指不定会出什么意外呢。

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